革蘭染色正確順序：1、涂片固定；2、草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘；3、蒸餾水沖洗；4、加碘液覆蓋涂面，染約1分鐘；5、水洗，用吸水紙吸去水分；6、加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分；7、蕃紅染色液（稀）染1分鐘后，蒸餾水沖洗；8、干燥，鏡檢。

　　革蘭染色步驟正確順序

　　革蘭氏染色是用來鑒別細(xì)菌的一種方法：這種染色法利用細(xì)菌細(xì)胞壁上的生物化學(xué)性質(zhì)不同，可將細(xì)菌分成兩類，即革蘭氏陽性與革蘭氏陰性。這一染色方法由丹麥醫(yī)生漢斯·克里斯蒂安·革蘭于1884年所發(fā)明，最初是用來鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關(guān)系。

　　原理：通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色。

　　而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過乙醇脫色后仍呈無色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。